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荧光光谱仪怎么设置?

发布时间: 2022-10-26 10:21

荧光光谱仪是一种用于扫描液体荧光标记物发出的荧光光谱的仪器。它可以提供许多物理参数,包括激发光谱、发射光谱、荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等。从各个角度反映了分子的成键和结构。那么荧光光谱仪怎么设置呢?下面来解答一下!

1、激发波长的选择

如何确定激发波长和发射波长?对于许多乐器初学者来说,这是一个令人困惑的问题。如果仪器有三维扫描功能,就比较简单了。把样品放进去,按照说明做三维荧光扫描,可以很容易的确定合适的激发波长和发射波长。如果仪器没有3D扫描功能,一般方法如下。

首先将仪器的激发波长(λem)设置为200nm,然后进行发射(EM)模式扫描,发射波长(λEM)的扫描范围暂定为210 ~ 800 nm,记录所有的峰值波长。更改激发波长(λem ),然后扫描。如果在第二发射光谱中的某个峰(或多个峰)的位置没有位移(或位移很小),一般来说,该峰(或多个峰)是荧光峰;因为荧光峰的位置不随激发波长的变化而变化,只是峰高(或峰面积)发生变化。

然后,将确定的荧光峰的波长固定为发射波长(λem),然后扫描激发波长(Ex),其范围小于发射波长;如果只有一个激发峰,很容易建立起来,然后固定这个波长再做一次真实发射波长(EM)扫描,就可以得到很好的信噪比。如果扫描激发波长(EX)后出现几个峰,应根据经验选择。一般应选择峰形、适宜性高、有一定带宽的峰作为激发波长。激发波长也可以通过参考荧光光谱的特性-激发光谱和发射光谱的镜像来确定。

2、过滤器的选择

当扫描和分析发射光谱时,根据斯托克斯定律,设定的激发波长比发射波长短。例如,如果激发波长λex=260nm,则发射起始波长应该从大于260nm的波长开始,例如270nm,发射终止波长应该是870nm。这样,在激发光的两倍(520nm)和三倍(780nm)处会出现激发波长的尖锐倍频峰。如果与荧光光谱峰重叠,会对测试产生干扰,所以需要选择合适的滤光片将其滤除。

倍频峰是激发光的散射峰。虽然扫描到两倍波长时出现波长,但实际波长是激发波长。可以通过添加高通滤波器来消除倍频峰值。一般高通滤波器放在发射处,芯片上标有能滤出的最大波长。也就是说,在系统中加入高通滤波器后,比上面标注的波长更低的光,包括这些光的双波长光和三波长光,都会被过滤掉;而波长高于其标示波长的光可以顺利通过。

3、狭缝的设置

荧光强度与许多因素有关,如分子结构、存在状态、溶液浓度或薄膜厚度、温度、选择的激发波长、测试狭缝的宽度等。不同仪器测得的荧光强度值差异较大,不具有可比性,但其峰值位置容易确定,可以用来判断是哪种物质。定量荧光分析必须固定一些条件。

狭缝的大小对荧光强度非常重要。狭缝的大小可以根据被测物质的荧光强度进行适当调整。在相同浓度下,如果荧光强度过高,超出仪器的测量范围,可以减小狭缝。但是,需要指出的是,荧光强度的变化不仅仅是狭缝的大小,还有分辨率。对于荧光扫描,狭缝的增加可以提高荧光强度和重现性,但分辨率下降。确定狭缝的分辨率,仪器的其他结构已经固定(光栅刻线数量、焦距、综合线性色散系数),狭缝的大小决定了分辨率。对于实际应用,狭缝尺寸需要与测量峰的半峰宽相匹配。如果太大,峰会变形。狭缝的大小也决定了光通量。根据经验值,狭缝扩大1倍,光通量会增加4倍。

4、步长设置

测量步长越小,测量越慢,地图越细腻;步长越长,测量速度越快,谱图越粗糙。步长应小于待测最小FWHM的1/5,因为步长与分辨率有关。原则上,步长应小于狭缝宽度的3倍。

以上是关于荧光光谱仪怎么设置的介绍,如你想了解更多,请继续浏览荧光光谱仪新闻栏目,如你想了解产品,可在线咨询或电话联系我们!

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常见问题

什么是RoHS?

RoHS是由欧盟立法制定的一项强制性标准,全称是《关于限制在电子电气设备中使用某些有害成分的指令》。该标准已于2006年7月1日开始正式实施,主要用于规范电子电气产品的材料及工艺标准,使之更加有利于人体健康及环境保护。

该标准的目的在于消除电器电子产品中的铅、汞、镉、六价铬、多溴联苯和多溴二苯醚(注意:PBDE正确的中文名称是指多溴二苯醚,多溴联苯醚是错误的说法)共6项物质,并重点规定了镉的含量不能超过0.01%。

最新RoHS指令新增加了邻苯四项检测项目,分别为DEHP:邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯,BBP:邻苯二甲酸丁基苄酯,DBP:邻苯二甲酸二丁酯,DIBP:邻苯二甲酸二异丁酯。

ROHS十项有害物质含量限值是多少?

1、镉:小于100ppm。

2、铅:小于1000ppm。

3、汞:小于1000ppm。

4、六价铬:小于1000ppm。

5、多溴联苯PBB:小于1000ppm。

6、多溴联笨醚PBD:小于1000ppm。

7、邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP):小于1000ppm。

8、邻苯二甲酸丁苄酯(BBP):小于1000ppm。

9、邻苯二甲酸二丁酯(DBP):小于1000ppm。

10、邻苯二甲酸二异丁酯(DIBP):小于1000ppm。

RoHS检测一般使用什么仪器?

用于RoHS1.0常用的检测仪器是X射线荧光光谱(XRF)。XRF分析仪有独立式、台式和手持式两种形式。通常首先使用手持式XRF分析仪进行便携式现场XRF测试,并专注于产品中含有受限物质风险较高的部分。

随着RoHS2.0出现,规定四种添加邻苯二甲酸酯也在rohs指令中,需要进行额外的测试以确定这些化合物的水平,这些化合物是用溶剂提取的。然后使用气相色谱结合质谱(GC/MS)或结合火焰电离检测(GC/FID)分析提取溶剂是否存在邻苯二甲酸盐。其它元素和多溴二苯醚/丙烯基弹性体分别由比较方案和GCMS进行分析。

RoHS十项需要两台仪器来检测吗?

RoHS十项需要两台仪器来检测。
对于RoHS十项检测来说必须要有两台仪器才能完成。单纯一台仪器是不可能实现的。即使用一台仪器测试重金属元素含量,另外一台测试化合物。
X荧光光谱仪来检测rohs1.0,而色谱仪或者是热裂解仪或质谱联用仪来检测rohs2.0项目中的邻苯四项,目前没有任何一台仪器能够单独检测rohs2.0项目。

ROHS检测仪器能否测试金属元素?

ROHS检测仪器,是一种用于检测电子元器件、家电、玩具等产品中是否含有有害物质的专业设备。这些有害物质可能会对人类和环境造成长期的威胁,因此ROHS检测仪器的应用具有极其重要的意义。

对于ROHS检测仪器能否测试金属元素这一问题,答案是肯定的。因为ROHS检测的范围不仅包括有害物质,同时也包括了合格产品中的金属元素成分的检测。这些金属元素包括铅、镉、汞等,这些元素在产品制造环节中被广泛使用。虽然这些元素是有必要的,但过多的使用对人体健康和环境保护都造成极大的危害。因此,ROHS检测仪器的出现为我们检测金属元素带来了很大的方便。

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