液相色谱仪是分析工作者最常用的一个仪器。深圳德谱仪器从事仪器行业多年，如何使用液相色谱仪，深感何时能将液相做到有“打游戏”感觉时，便是到了游刃有余、驾轻就熟的境界。现今的液相软件均已具备了强大的数据处理功能，如能庖丁解牛般使用，便可将此测定做到事半功倍、轻松自如。

一、溶质如何在水相中溶解

对于需要溶解在水相中的无机盐类、表面活性剂等固溶体，推荐加热，不推荐摇晃、超声等。 因此，这种溶解方式，溶质可能处于“临界胶束浓度”，然后遇特殊情况（如有机溶剂、温度急剧下降、  ETC。）; 一旦析出，会损坏仪器和色谱柱，在泵头处析出“盐白粉”现象。

二、流动相的制备和使用

1. 恒定洗脱

必须在水相和有机相混合后，抽滤（使用混合滤膜），用管道（如A管）泵入仪器。 这就是使用原则。 请勿使用两条管路（一根纯水相，一根纯有机相）泵入仪器，以节省有机相，便于探索色谱条件，即使配备脱气机。 因此，这种情况很可能导致水相中出现少量盐类和表面活性剂的沉淀。

剩余流动相可继续完全使用，密封放置阴凉处； 下次测试时可与新配制的流动相混合，然后抽滤。 不用担心发霉、无机盐析出、挥发、比例不准确等，这些都是妄想症的表现。 实践是检验真理的唯一标准！ 实践一下~

2.梯度洗脱

最科学的流动相制备方法是：A相为高比例水相-低比例有机相，B相为低比例水相-高比例有机相（英国药典几乎是 相同的）; 其次是：A相是高比例的水相——低比例的有机相，B相是纯有机相； 最不科学的是：A相是纯水相，B相是纯有机相，如果现有的质量标准用这个建议换成第二种或第一种方法，否则基线漂移严重，很难 进行稳定的杂质检测。

梯度洗脱完成后，建议5分钟后恢复初始状态，平衡5分钟后开始下一次测量。 这 10 分钟的稳定非常关键。 不要在短时间内恢复到初始状态，否则会对仪器和色谱柱造成很大的损坏。

三、色谱柱的安装

标准 SOP 应该是：

取A管放入流动相瓶→拧下泵头→流速从0ml/min逐渐增加到10ml/min，10秒观察尾液是否呈瀑布状流出→拧紧泵 头部 → 流动相从安装好的色谱柱一端喷出，观察是否为抛物线 5 秒 → 流速逐渐降低至 1.0ml/min → 安装好色谱柱，等待 20 秒，流动相 从色谱柱的另一端呈弹簧状流出，然后安装另一端→握住两端的螺帽并拧紧。

上述安装顺序如下：

残留在仪器内的气泡和清洗液会逐步排出，安装后气泡极难混入。 我用梯度洗脱实验了一周，第一次进样和最后一次进样的主成分保留时间相差在6秒以内。

五、 试验顺序

工作流程应如下进行：

(1) 0~2小时 配制流动相、对照品和供试品溶液等，切勿催促昨日试验同事。

(2) 2~3小时 采用A管路注入流动相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脱才用到B管路），平衡1小时。如流动相中有表面活性剂，建议前一晚小流速过夜，第二天上班后将流速增至1.0ml/min，平衡1小时后即可开始做试验。

(3) 3~5小时 测定空白溶剂，一定要做到基线不漂移后方可开始测定。所谓“不漂移”，通常系指以1.0%自身对照溶液主成分峰高约20%高度来设定的视野范围观察所得，切不可设定得过小，使得杂质峰显得很突兀、基线抖动得很厉害，弄得人很担心。

(4) 5~8小时 配制完所有样品，预试了对照溶液和供试品溶液，设定好自动进样程序，程序最后一针设定为小流速过夜，紫外灯关闭。切勿设定为切换至B管路洗脱，此举得不偿失。

(5) 9~24小时 放心回家，让仪器自动进样，除非不稳定的样品（配制一份测定一针）。充分利用下班后的16小时，做到从容不迫、镇定自若。如单位还无自动进样装置，建议向领导申请购买，因一台自动媲美三台手动。

(6) 第二天0~0.5小时 检查并计算昨晚试验结果，如发现不良记录，将流速增至1.0ml/min，平衡30分钟后，测定重新配制的该份样品即可（同时回校对照一针）。无需全部重新测定，不要过度谨小慎微。

(7) 第二天0.5~2.0小时 如上冲洗色谱柱，交给其后试验同事。

六、 液相软件的使用

现今几大主流品牌的硬件性能已相差无几，主要还是软件的设计是否能使操作者得心应手、随心所欲。

建议掌握各软件的批处理、编辑样品处理模板等功能，做到一劳永逸，让软件充分为工作所用。“磨刀不误砍柴工”：本人曾用20分钟完成500个溶出度样品数据处理，做出溶出曲线图。体会一下~

七、 其他

1.如需使用正相系统，一定要单独采用一台仪器（如二手的、较为破旧的、淘汰的等），切勿采用异丙醇转换，此举对仪器损伤极大，等于“自杀”。

2. 正相所使用的流动相（如正己烷、环己烷等），无需抽滤，混匀超声后即可使用，“大道至简”。

3. 柱温箱必须配制。如欲经济，可购买国产柱温箱。